伍文定，字时泰，湖北松滋人。他的父亲伍琇，当过贵州参议。文定自己考中弘治十二年(1499)进士。他臂力过人，擅长骑马、射箭，议论事情慷慨激昂。当初做常州推官，办事精明、勤快，很会断案，被称为强干的小吏。魏国公徐俌与百姓争抢田地，文定把田判给了百姓。刘瑾得到徐俌送的重礼后，就制造大案，巡抚艾朴以下十四个人都被逮捕了。文定已经升调为成都同知，也被抓进京城的大牢中，结果被罢官为民。刘瑾败亡以后，他重新起用到嘉兴做官。后来他升任河南知府，设计擒获了大盗张勇、李文简。因有才干能胜任繁难的政务，被调往吉安。他施计平定了永丰和大茅山的盗贼。不久，辅佐巡抚王守仁平定了桶冈、横水。

　　朱宸濠反叛，吉安的士绅、百姓争先恐后地逃跑或躲藏。文定斩杀了一个逃亡的人，众人才安定下来。于是他把王守仁迎入城中。知府刑王珣、徐琏、戴德孺等先后到来，一起讨伐贼寇。文定担任大帅。丙辰之战中，文定亲自冒着箭和滚石的威胁向前，大火烧着胡须也不退后一步。贼寇被平定，他战功最大，被提升为江西按察使。张忠、许泰到南昌，想顶替他的战功，而守仁已经俘获宸濠押赴浙江去了。张忠等人大失所望，非常嫉恨。文定出来拜见，他们就把文定给绑了。文定骂道“：我不顾及九族的命运，为国家平定反贼，有什么罪？你们是天子的心腹，侮辱国家的忠臣义士，为反贼报仇，依法应该斩了你们。”张忠更加恼怒，把文定捶倒在地。文定后来上书皇帝请求解职，皇帝没有答复。

　　不久他调任广东右布政使。尚未赴任，世宗皇帝即位。他上书检举张忠等人的罪状，并且说：“过去张忠、许泰与刘晖到江西来，张忠自称是天子的弟弟，刘晖自称天子的儿子，许泰自称威武副将军，与天子是同僚。他们侮辱朝廷命官，诬害残害良民，提出万般要求，侵夺了百万余资财，致使江西到处是饿死的百姓，盗贼汹汹而起。现在即使把三个碎尸万段，也不足以向江西百姓谢罪。如今大恶人江彬、钱宁都已经伏法，这三个人实际上是他们的党羽。请求尽快将他们正法，用以彰显国家的典章制度。”又请求发放宸濠的资产，发还给江西，用来补给江西的经费；怜悯开释张忠、许泰所陷害的无罪者以及宁府没参与阴谋的同宗族的人，以清理冤狱。世宗一并嘉奖并采纳了。

　　评定功绩，文定升为右副都御史，负责督办长江防务。嘉靖三年(1524)讨伐海盗，擒获了董效等二百多人，皇帝赐诏书奖赏慰劳。不久称病辞官回乡。文定以忠臣义士自许，遇到事情敢作敢为，不随时事而见风使舵。嘉靖九年(1530)七月他死在家中。天启初，朝廷追赠他为“忠襄”的谥号。